News
Development Strategies for Immunological Assays to Detect Host Cell Protein (HCP) Residues in Biolog
2025-03-26 218Visits
ELISA是各国药典推荐用于检测生物制品中残留宿主细胞蛋白(HCP)的方法，能够测定HCP的总量。然而，ELISA存在局限性，无法区分HCP的种类及其丰度，因此需要其他检测方法来补充其不足。每种检测技术都有其独特的优势和不足，在实际应用中，应根据实验目标、样品特性、所需准确度以及操作的便捷性等因素，选择并结合使用不同的方法，以获得更全面和精确的检测结果。
此外，美国药典USP<1132>和欧洲药典EP 2.6.34. HOST-CELL PROTEIN ASSAYS明确指出，在产品开发的不同阶段，建议使用不同的ELISA试剂盒进行HCP检测。它们将HCP检测方法分为三类：商业化试剂盒、产品/工艺特异性方法和平台化方法。
对比指标 | 通用试剂盒检测方法 | 平台化检测方法 | 项目专属性检测方法 |
可用性 | 即时可用，已有商品化产品，减少开发周期。 | 需要使用null细胞系或mock细胞系制备抗原。 | 需要制备抗原，包括克隆mock细胸系. |
开发 | 无需太多准备工作。 | 包括抗原表征、免疫，和确认在内的检测开发至少需要9个月时间。 | 包括抗原表征、免疫和确认在内的检测开发至少需要7个月时间。 |
特异性 | 特异性可能不佳，很可能有未检测到的HCP。 | 与商业检测方法相比，特异性、检测性能有所增强，对HCP种类的覆盖率也有所提高。 | 特异性通常有所增强，抗体覆盖率更能针对特定工艺下的HCP。 |
费用 | 初期价格相对便宜，但对整个DSP周期而言，开发成本将迅速上升。 | 由于可用于多种产品，具有显著的成本优势。 | 初期成本较高，但收支平衡点通常是在100套试剂盒的价值。 |
依赖性 | 依赖于某个供应商，试剂和控制方案属于“黑匣子”技术。 | 对所有试剂具有完整的所有权和控制权，可降低供应链和批次可比性的风险。 | 能对所有试剂和缓冲液取得全面控制，可以随时进行优化、调整。 |
监管需求 | USP要求在临床IⅡ期之前可以使用商业化试剂盒，不适合用于支持上市许可申请。 | 适用于支持早期开发直至BLA(从早期阶段过渡到上市许可申请期间的风险更低)。 | 适用于支持许可产品从早期开发到最终产品上市的整个过程。 |
在我们获得抗原以及多克隆抗体之后，就可以开始ELISA的方法开发。开发一般分为了五个部分，从而实现从原材料筛选到方法建立，最后到规模化生产的流程。
2.1原材料相关
包括原材料（如抗体及其他试剂）的制备与筛选。HCP的抗体有时会涉及到抗体池，即抗体制备时采用多种动物免疫策略等，最终收获多个HCP抗体，那此时需要将抗体进行组合筛选，通过抗体覆盖率、效价、初步ELISA实验表现等综合评估，最终选择其中效果最好的一组进行后续开发。制备不同类型的稀释用缓冲液，用于稀释和保存抗原/抗体。通过实验确定最佳的包被缓冲液，提高抗原/抗体在固相载体上的结合效率。选择合适的封闭液，减少非特异性结合，提高信号背景比。
2.2方法学建立建立
ELISA的基本操作步骤和条件，形成初步的方法学。确定最佳的包被浓度、时间和温度，确保抗原/抗体在固相载体上的均匀分布。优化洗涤次数和洗涤缓冲液，去除未结合的物质，减少非特异性干扰。确定最佳的孵育时间、温度和振荡条件，确保抗原/抗体的充分结合。优化显色时间和终止液的选择，确保显色反应的稳定性和可重复性。选择合适的酶标仪和读取波长，确保数据的准确性和可靠性。
2.3方法学验证验证
建立的方法学是否满足预期的性能要求。通过交叉反应实验，验证抗原/抗体的特异性，确保无交叉反应。通过标准曲线法，测定方法的最低检测限（LOD）和定量下限（LLOQ）。通过多点稀释实验，验证方法的线性范围。通过重复性和再现性实验，验证方法的精密度。通过回收率实验，验证方法的准确性。通过长时间放置实验，验证试剂盒的稳定性。
2.4方法学确认确认
方法学在实际应用中的适用性和可靠性。使用针对项目的不同工艺步骤的样品或不同基质的样品，验证方法学的适用性。通过多批次试剂盒的测试，验证批间一致性。与已知的标准方法进行比对，验证方法的可靠性和一致性，并及时发现和解决问题。
2.5规模化生产
将验证和确认的方法学应用于大规模生产，确保产品质量和稳定性。根据小规模实验结果，优化生产工艺参数，实现大规模生产。建立严格的质量控制体系，确保每一批次的产品都符合质量标准。详细记录生产过程中的关键参数和数据，确保可追溯性。定期进行稳定性测试，确保产品在有效期内的性能稳定。采用合适的包装材料和运输方式，确保产品在运输过程中的安全和完整性。
君研生物拥有成熟且全面的技术平台，可以提供针对不同宿主细胞HCP检测的定制化开发服务。依托高效的抗体研制平台和先进的研发仪器设备，公司实现了从HCP抗原表征、高覆盖率HCP抗体制备分析、分析方法开发验证到试剂盒规模化生产的全流程服务，确保高质量的HCP ELISA检测试剂盒的开发和稳定供应。我们对技术的不懈追求和对质量的严格把控，旨在为您提供安心、高效的服务体验。
采用高分辨LC-MS法对抗原进行全方位表征，获取HCPs身份信息。
丰富的HCP抗体制备经验，采用多种策略组合，保证高质量抗体获得。
使用先进的AAE-MS抗体覆盖率检测平台，对抗体进行表征。
按照中国药典、ICH等标准进行完整的方法学验证，符合申报注册。
严格遵循ISO13485 质量体系进行开发和转产，接受客户现场审计。
专业技术团队全流程服务，实时汇报沟通项目进展
为了更好地满足生物制品检测要求，加速生物制品工艺优化以及安全放行，君研生物自主研发了支持商业化的高覆盖HCP检测试剂盒，包含CHO HCP残留检测试剂盒、E.coli表达菌HCP残留检测试剂盒。所有试剂盒均经过完整的方法学验证，确保性能稳定可靠。
名称与货号 | CHO HCP 残留检测试剂盒（酶联免疫吸附法） Cat.：HCH0111A-96 | ||
反应体系 | 2h+0.5h | 定量限 | 3ng/mL |
检测范围 | 3-486 ng/mL | 加标回收率 | 80%-120% |
检测限 | ≤1 ng/mL | 重复性（批内CV） | ≤10% |
制备工艺完善：标准品的代表性（细胞及工艺），充分表征；
抗体覆盖率高：高达86%，总量多，满足产品全生命周期；
检测方便快捷：使用一步法，只需2.5h 左右即可出结果；
特异性强：与BSA、Protein A、E. coli HCP无交叉反应；
供货稳定：产品自研自产，保证供货周期。
名称与货号 | E.coli表达菌HCP残留检测试剂盒（酶联免疫吸附法） Cat：HC0111A-96 | ||
反应体系 | 2h+0.5h | 定量限 | 1 ng/mL |
检测范围 | 1-243 ng/mL | 加标回收率 | 80%-120% |
检测限 | <1ng/mL | 重复性（批内CV） | ≤10% |
标准品制备：选用有工艺代表性的标准品，覆盖常见高风险因子；
抗体覆盖率高：高覆盖率抗体（>88%）、总量多，总量满足5-10年内使用；
检测方便快捷：使用一步法，只需2.5h 左右即可出结果；
特异性强：经过多种样本基质验证，与常见工艺杂质无交叉反应。
供货稳定：产品自研自产，保证供货周期。
Follow us
Sales： +86 15234188795/18701864343
Tech ： +86 19503412257
E-mail： sales@junyanbios.cn
Add： Building D, No. 13 Building, Liandong U Valley Taiyuan Science and Technology Innovation Center, No. 100 Tanghuai Road, Xiaodian District, Taiyuan City, Shanxi Province
Copyright © 2025-2026 All Rights Reserved. :晋ICP备2024052786号-2